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液相色譜柱的使用和維護(hù)注意事項(xiàng)

色譜柱的正確使用和維護(hù)十分重要，稍有不慎就會(huì)降低柱效縮短使用壽命甚至損壞在色譜操作過程中，需要注意下列問題，以維護(hù)色譜柱

　　避免壓力和溫度的急劇變化及任何機(jī)械震動(dòng)溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會(huì)影響柱內(nèi)的填充狀況;柱壓的突然升高或降低也會(huì)沖動(dòng)柱內(nèi)填料，因此在調(diào)節(jié)流速時(shí)應(yīng)該緩慢進(jìn)行，在閥進(jìn)樣時(shí)閥的轉(zhuǎn)動(dòng)不能過緩(如前所述)

　　.應(yīng)逐漸改變?nèi)軇┑慕M成，特別是反相色譜中，不應(yīng)直接從有機(jī)溶劑改變?yōu)槿渴撬?，反之亦?/span>

　　一般說來色譜柱不能反沖，只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時(shí)，才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)否則反沖會(huì)迅速降低柱效

　　選擇使用適宜的流動(dòng)相(尤其是pH)，以避免固定相被破壞有時(shí)可以在進(jìn)樣器前面連接一預(yù)柱，分析柱是鍵合硅膠時(shí)，預(yù)柱為硅膠，可使流動(dòng)相在進(jìn)入分析柱之前預(yù)先被硅膠"飽和"，避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解

　　經(jīng)常用強(qiáng)溶劑沖洗色譜柱，清除保留在柱內(nèi)的雜質(zhì)在進(jìn)行清洗時(shí)，對(duì)流路系統(tǒng)中流動(dòng)相的置換應(yīng)以相混溶的溶劑逐漸過渡，每種流動(dòng)相的體積應(yīng)是柱體積的20倍左右，即常規(guī)分析需要50~75ml

　　下面列舉一些色譜柱的清洗溶劑及順序，作為參考：硅膠柱以正已烷(或庚烷)二氯甲烷和甲醇依次沖洗，然后再以相反順序依次沖洗，所有溶劑都必須嚴(yán)格脫水甲醇能洗去殘留的強(qiáng)極性雜質(zhì)，已烷使硅膠表面重新活化反相柱以水甲醇乙腈一氯甲烷(或氯仿)依次沖洗，再以相反順序依次沖洗如果下一步分析用的流動(dòng)相不含緩沖液，那么可以省略zui后用水沖洗這一步一氯甲烷能洗去殘留的非極性雜質(zhì)，在甲醇(乙腈)沖洗時(shí)重復(fù)注射100~200µl四氫呋喃數(shù)次有助于除去強(qiáng)疏水性雜質(zhì)四氫呋喃與乙腈或甲醇的混合溶液能除去類脂有時(shí)也注射二甲亞砜數(shù)次此外，用乙腈丙酮和三fu醋酸(0.1%)梯度洗脫能除去蛋白質(zhì)污染陽離子交換柱可用稀酸緩沖液沖洗，陰離子交換柱可用稀堿緩沖液沖洗，除去交換性能強(qiáng)的鹽，然后用水甲醇二氯甲烷(除去吸附在固定相表面的有機(jī)物)甲醇水依次沖洗

　　保存色譜柱時(shí)應(yīng)將柱內(nèi)充滿乙腈或甲醇，柱接頭要擰緊，防止溶劑揮發(fā)干燥禁止將緩沖溶液留在柱內(nèi)靜置至第二天或更長(zhǎng)時(shí)間

　　色譜柱使用過程中，如果壓力升高，一種可能是燒結(jié)濾片被堵塞，這時(shí)應(yīng)更換濾片或?qū)⑵淙〕鲞M(jìn)行清洗;另一種可能是大分子進(jìn)入柱內(nèi)，使柱頭被污染;如果柱效降低或色譜峰變形，則可能柱頭出現(xiàn)塌陷，死體積增大在后兩種情況發(fā)生時(shí)，小心擰開柱接頭，用潔凈小鋼將柱頭填料取出1~2mm高度(注意把被污染填料取凈)再把柱內(nèi)填料整平然后用適當(dāng)溶劑濕潤(rùn)的固定相(與柱內(nèi)相同)填滿色譜柱，壓平，再擰緊柱接頭這樣處理后柱效能得到改善，但是很難恢復(fù)到新柱的水平柱子失效通常是柱端部分，在分析柱前裝一根與分析柱相同固定相的短柱(5~30mm)，可以起到保護(hù)延長(zhǎng)柱壽命的作用采用保護(hù)柱會(huì)損失一定的柱效，這是值得的 通常色譜柱壽命在正確使用時(shí)可達(dá)2年以上以硅膠為基質(zhì)的填料，只能在pH2~9范圍內(nèi)使用柱子使用一段時(shí)間后，可能有一些吸附作用強(qiáng)的物質(zhì)保留于柱頂，特別是一些有色物質(zhì)更易看清被吸著在柱頂?shù)奶盍仙闲碌纳V柱在使用一段時(shí)間后柱頂填料可能塌陷，使柱效下降，這時(shí)也可補(bǔ)加填料使柱效恢復(fù)每次工作完后，用洗脫能力強(qiáng)的洗脫液沖洗，例如ODS柱宜用甲醇沖洗至基線平衡當(dāng)采用鹽緩沖溶液作流動(dòng)相時(shí)，使用完后應(yīng)用無鹽流動(dòng)相沖洗含鹵族元素(fu氯溴)的化合物可能會(huì)腐蝕不銹鋼管道，不宜長(zhǎng)期與之接觸裝在HPLC儀上柱子如不經(jīng)常使用，應(yīng)每隔4~5天開機(jī)沖洗15分鐘